Brilliantblau G250

Acid Blue 90 [engl.], Brilliantblau G, C.I. 42655, Coomassie, Coomassie Blue [engl.], Coomassie G250, ...

Chemie

Na⁺

C₄₇H₄₈N₃NaO₇S₂

Schmelzpunkt

pK_S

Brillantblau G ist ein zentraler Bestandteil der Methode nach Bradford zur Bestimmung der Proteinkonzentration in einer Lösung.
Durch Bindung an ein Protein kommt es in saurer Lösung zu einer Verschiebung des Absorptionsmaximums von 465 nm auf 595 nm.
Bradford Reagenz:
- 0,01 g Brillantblau G, 4.7 g Ethanol und 8,5 g Phosphorsäure werden mit Wasser zu 100 g verdünnt.
Brillantblau bindet nicht in identischen stöchiometrischen Verhältnissen an jedes Protein, da der Farbstoff v.a. an Arginin und aromatische Aminosäuren bindet und somit die Menge gebundenen Farbstoffs von der Aminosäuresequenz des Proteins abhängig ist.
Die Verwendung von Protein-Standards ist daher nötig, um den Test auf das gewünschte Protein zu kalibrieren. Ist keine reine Probe des zu testenden Proteins verfügbar, so sollte ein geeignetes (also möglichst vergleichbares) anderes Protein als "externer Standard" zur Kalibration eingesetzt werden.
- Häufig werden BSA und γ-Globulin als externe Standards eingesetzt, wobei letzteres vor allem bei Proben mit größeren Proteingemischen verwendet wird.